參考答案：

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檢測周期

一般3-15個工作日，可加急。

檢測方式

可寄樣檢測、目測檢測、見證試驗(yàn)、現(xiàn)場檢測等。

檢測費(fèi)用

具體根據(jù)多肽合成儀檢測檢測數(shù)量和項(xiàng)目而定。詳情請咨詢在線客服。

檢測產(chǎn)品

0多肽合成儀簡介

美國洛克菲勒大學(xué)教授Bruce Merrifield 在1963年發(fā)明的多肽固相合成技術(shù)（SPPS）是多肽合成領(lǐng)域的一個重大突破，對化學(xué)，生化，醫(yī)藥，免疫和基因科學(xué)等學(xué)科和領(lǐng)域都起了巨大的推動作用。 他本人也因此項(xiàng)發(fā)明榮獲1984化學(xué)諾貝爾獎。

1多肽合成儀現(xiàn)有專利

對于大學(xué)、實(shí)驗(yàn)室等科研用戶以及需要申報新藥的生產(chǎn)企業(yè)來講，使用的合成設(shè)備的國際專利號以及規(guī)定內(nèi)容是非常有用的信息。

ACT多肽合成儀專利：United States Patent 4746490

Activotec合成應(yīng)用技術(shù)專利： IPC8 Class: AC07K104FI USPC Class: 525 5411

CEM合成技術(shù)專利：US 7,582,728

C S Bio多肽合成儀專利：US Patent 5,380,495 & 5,453,487.

C S Bio多肽合成儀反應(yīng)器專利：US Patent 6320025

PTI多肽合成儀設(shè)備專利： U.S. Patent No. 5,203,368 (Symphony). No. 5,064,940 (PS3).

PTI多肽合成儀反應(yīng)器專利：U.S. Patent No. 5,980,839.

Shimadzu多肽合成儀專利：United States Patent 5344613

2多肽合成儀重點(diǎn)

科研單位考慮因素

a) 設(shè)備本身對實(shí)驗(yàn)研究的幫助

①對于多肽合成化學(xué)反應(yīng)，使用設(shè)備可避免人手工操作對人體的傷害(試劑腐蝕)

②由于程序化設(shè)定，可保證每步驟偶合反應(yīng)的充分性以及實(shí)驗(yàn)整體的穩(wěn)定性

③可以合成難肽以及超長肽(制造商需要提供其使用研究型多肽合成儀合成多肽的檢測報告)

④在休息時間可以不間斷合成工作

研究型多肽合成儀需滿足循環(huán)式氨基酸添加位置多于20個，在夜間以及周末，預(yù)先配好的保護(hù)氨基酸可根據(jù)程序設(shè)置自動偶聯(lián)并替換新的位置，保證了實(shí)驗(yàn)的效率，完全實(shí)現(xiàn)全自動。

⑤即使實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了很多年，更換了很多研究人員，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還可以保存在電腦中。

b) 國際國內(nèi)相關(guān)研究人員使用該多肽合成儀進(jìn)行的有效研究結(jié)果

多肽合成儀的制造商應(yīng)提供其公開發(fā)表的研究性論文多篇。 為進(jìn)行多肽合成實(shí)驗(yàn)的學(xué)生們提供研究數(shù)據(jù)并使其模擬合成過程，更好的體驗(yàn)機(jī)械操作多肽合成的全步驟，檢測自己的合成結(jié)果。

c) 多肽合成儀設(shè)備的專利保護(hù)對今后研究結(jié)果的影響

考慮到高等院校實(shí)驗(yàn)研究的嚴(yán)密性，結(jié)合對后期研發(fā)成果的保護(hù)機(jī)制，通常采購的設(shè)備需要具有其國際專利許可，以確保實(shí)驗(yàn)研究項(xiàng)目的順利申報。

d) 制造商的生產(chǎn)規(guī)模

制造商的品牌、生產(chǎn)規(guī)模以及其所擁有的生產(chǎn)資格認(rèn)證，都從側(cè)面反映了其供應(yīng)設(shè)備的質(zhì)量、信譽(yù)以及對客戶的服務(wù)保證。

e) 價格

科研單位以選擇持久耐用、有品牌保證的多肽合成儀為主。但不排除部分國產(chǎn)制造商對其品牌的虛假宣傳因素，選購時應(yīng)注意，進(jìn)口小型設(shè)備的價格在5－10萬美金為宜，國產(chǎn)小型設(shè)備的價格在5－10萬人民幣為宜。科研機(jī)構(gòu)購買進(jìn)口設(shè)備可申請免稅。

生產(chǎn)企業(yè)考慮因素

參考科研單位選購小型設(shè)備的考慮因素，對于生產(chǎn)型企業(yè)，使用不同品牌的多肽合成儀往往還應(yīng)考慮其連貫完整的設(shè)備生產(chǎn)線，從小型合成規(guī)模至生產(chǎn)型合成規(guī)模的各種設(shè)備齊全。通常大型設(shè)備可根據(jù)反應(yīng)器大小判斷其合成規(guī)模，通?？稍诰€切割的玻璃材質(zhì)反應(yīng)器/反應(yīng)釜需達(dá)100L，可保證批量產(chǎn)數(shù)十公斤的多肽產(chǎn)品。

3多肽合成儀功能操作

運(yùn)行原理

多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理，在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序（序列，一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端）不斷添加、反應(yīng)、合成，操作較終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生，參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是保護(hù)的。羧基端是游離的，并且在反應(yīng)之前必須活化。固相合成方法有兩種，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢，現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成，但對于某些短肽，tBoc因其產(chǎn)率高的優(yōu)勢仍然被很多企業(yè)所采用。

具體合成由下列幾個循環(huán)組成：

1） 去保護(hù)：Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去 除氨基的保護(hù)基團(tuán)。

2） 激活和交聯(lián)：下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化?；罨膯误w與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián)，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán)：這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成。

3） 洗脫和脫保護(hù)：多肽從柱上洗脫下來，其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑（TFA） 洗脫和脫保護(hù)。

基本元件

反應(yīng)器

數(shù)百年來，制藥業(yè)的反應(yīng)器/反應(yīng)釜 設(shè)備以玻璃材質(zhì)較為常見，因其完全透明且耐腐蝕，而被眾多化學(xué)、生物學(xué)專家沿用。多肽合成的過程需要操作人員直觀監(jiān)測，同時合成后可進(jìn)行在線切割（切割試劑TFA的強(qiáng)腐蝕性對反應(yīng)器材質(zhì)有了*大限制），這些要求限制反應(yīng)器以玻璃材質(zhì)較為適用。　玻璃材質(zhì)的反應(yīng)器在制造工藝上有*大的難度限制：①燒制工藝：磨口精度要求*高，正如很多國產(chǎn)設(shè)備都無法達(dá)到要求出現(xiàn)漏液漏氣現(xiàn)象，玻璃壁均勻程度等。②配合攪拌柄以及密封裝置的成套加工工藝③防爆處理

氨基酸儲罐

用來儲存氨基酸粉末或預(yù)先活化溶解好的氨基酸溶液。小型合成儀的氨基酸儲罐一般在20－40個之間以保證無人監(jiān)控下的全自動縮合反應(yīng)順利進(jìn)行。大型合成儀根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模的不同，配置也各不相同。

溶劑儲罐

用來儲存多肽合成過程中需要的有機(jī)溶液，如DMF,PIP等。

量筒

用來測量氨基酸溶液與其他試劑的合成量，需有精密型傳感器設(shè)計刻度并回傳信息至電腦控制程序。因早期的恒壓法測定偏差過大且操作繁瑣，而采用此方法測定。觸發(fā)器的數(shù)量根據(jù)不同客戶的要求而定，不同的品牌也略有不同。

轉(zhuǎn)液瓶

感應(yīng)器

多端觸發(fā)器自感應(yīng)定量量取法，直觀、科學(xué)、相對誤差。代替早期的恒壓法，避免了每日進(jìn)行的大量的數(shù)學(xué)運(yùn)算，操作更為簡單，測定誤差值可控制在1%。

廢液桶

廢液桶通常選擇容積較大的HDPE桶，保證通風(fēng)良好，同時需安裝感應(yīng)器裝置時刻檢測廢液情況，避免溢出。

控制配件

電磁閥

多肽合成儀中的電磁閥屬于敏感配件，其控制液路的串聯(lián)與閉路，在氨基酸轉(zhuǎn)移與量取，溶劑轉(zhuǎn)移與量取兩步驟中起到至關(guān)重要的作用。不同品牌的合成儀對電磁閥的設(shè)計與排布也略有不同。

控制面板

控制面板內(nèi)往往含有光敏組建，部分控制電磁閥以及感應(yīng)器控制組。與電腦主機(jī)的控制系統(tǒng)、合成儀統(tǒng)一的鏈接在一起，完成多肽合成的全過程。

軟件系統(tǒng)

多肽合成儀的操作軟件。不同品牌合成儀所注冊的軟件也不同。

檢測方法

a) UV Monitor

在多肽合成儀中，在線檢測耦合效果的裝置，如UV Monitor往往是選配裝置，客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要選購。其功能是讓操作者直觀的看到多肽合成的每一部氨基酸偶聯(lián)效果，從而針對特定的序列做合成設(shè)置的調(diào)整，較終達(dá)到合成效果。

對于不熟悉多肽合成儀操作的用戶來說，UV Monitor是相當(dāng)重要的。

b) 試劑檢測

沒有選購在線檢測附件的多肽合成儀用戶，也可以采用試劑檢測方法做基本的耦合效果測定實(shí)驗(yàn)。

固相多肽合成中，主要是通過檢測樹脂上游離氨基來判斷連接效率，檢測方法稱為Kaiser方法，其檢測結(jié)果，如果有游離氨基的時候，顯示蘭色，或紅褐色（pro，ser，His）。

Kaiser試劑包括：A，6% 茚三酮的乙醇溶液；B，80% 苯酚的乙醇溶液；C，2% 0.001M KCN的吡啶溶配制中的吡啶需要經(jīng)過茚三酮處理后，重蒸后再使用。檢測過程，取少量樹脂，加入A，B，C各2-3滴，100℃下加熱1-2min，如果溶液有蘭色，或樹脂出現(xiàn)蘭色，紅褐色，表明還有游離氨基，否則說明連接完全。

4多肽合成儀時代分類

多肽合成儀的問世大大促進(jìn)了多肽科學(xué)的發(fā)展。反過來，隨著多肽科學(xué)的發(fā)展，科學(xué)家也對合成儀提出了更高的要求，從而帶動了合成儀的發(fā)展。目前多肽合成儀品種繁多，從合成量上分，可分為微克級的，毫克級的，克級的和公斤級的；從功能上分，可分為研究型的，小試型的，中試型的，普通生產(chǎn)型的和GMP生產(chǎn)型的；從自動化程度上分，可分為全自動的，半自動的和手動的；從通道上分，可分為單通道的和多通道的；從技術(shù)角度上分，可分為代的，第二代的，和第三代的；等等。

代多肽合成儀

代多肽合成儀產(chǎn)生時間為上世紀(jì)六十年代末至七十年代初。

代表產(chǎn)品是Beckman公司推出的Beckman 990 Peptide Synthesizer和Vega’s Biotechnologies公司推出的Vega’s 296 Peptide Synthesizer。如今該兩家公司均以放棄了多肽合成儀的研發(fā)與生產(chǎn)，我們只能在早期的學(xué)術(shù)文獻(xiàn)中找到其設(shè)計原理與研究情況。雖然隨著生產(chǎn)工藝的改進(jìn)和發(fā)展，代多肽合成儀已全部退出了市場。但1990年以前的眾多肽化學(xué)文獻(xiàn)都是在此實(shí)驗(yàn)設(shè)備上運(yùn)行研發(fā)而來，代的多肽合成儀為之后的合成儀研發(fā)與制造產(chǎn)生了重大意義。

第二代多肽合成儀

第二代多肽合成儀誕生在上世紀(jì)八十年代。

代表產(chǎn)品是Protein Technologies公司推出的PS3 Peptide Synthesizer以及Advanced ChemTech公司推出的ACT peptide synthesizer Model 90。標(biāo)志性特點(diǎn)是溫和反應(yīng)法合成多肽，一般可分為單純氮?dú)夤呐莺蛽u動式兩種。

PS3 的設(shè)計原理是采用氮?dú)夤呐莸姆磻?yīng)方式來對反應(yīng)物進(jìn)行攪拌，即合成儀上反應(yīng)器是固定的，氮?dú)鈴姆磻?yīng)器的下方通過反應(yīng)器到上部排出，在這一過程中產(chǎn)生的汽泡把固相和液相混合起來。這樣設(shè)計的好處是結(jié)構(gòu)簡單，成本低，但反應(yīng)相對溫和：1）有時候多肽-固相載體在靜電作用下會“抱團(tuán)”，使其不能與液相充分混合，在這種情況下需要調(diào)高氮?dú)獾膲毫σ韵o電作用；而在靜電作用消除后要把壓力立刻調(diào)低，不然的話較高的壓力會把多肽-固相載體“吹”到反應(yīng)器液面上方。由于多肽-固相載體具有較強(qiáng)的粘壁性，一旦被粘到反應(yīng)器液面上方就再也無法下來，也就是無法再參加反應(yīng)。顯然代機(jī)器是無法自動作這樣的壓力調(diào)整的，這就是造成反應(yīng)“死角”的重要原因。反應(yīng)死角會降低多肽合成的效率和多肽的純度，有的甚至造成合成的失敗。2）長時間氮?dú)夤呐輹谷芤簱]發(fā)，液面降低后一部分多肽-固相載體就粘在液面上方，也無法再參加反應(yīng)。3）氮?dú)庀牧看螅\(yùn)行成本增大。　ACT90的設(shè)計原理是反應(yīng)器在直立下圍繞原點(diǎn)作左右擺動，或者圓周運(yùn)動。ACT的多肽合成儀同樣具有反應(yīng)溫和的特點(diǎn)，即轉(zhuǎn)動角度與速度都不能夠完全達(dá)到氨基酸耦合的*限，反應(yīng)往往需要更長的時間。

第三代多肽合成儀

第三代多肽合成儀誕生在上世紀(jì)九十年代

代表產(chǎn)品是美國Applied Biosystems公司的ABI 433 peptide synthesizer 與C S Bio公司的CS336無死角多肽合成儀。ABI433的設(shè)計原理是反應(yīng)器上方相對固定，而下方作圓周360度快速旋轉(zhuǎn)，帶動反應(yīng)器里的固液兩相從底部向上作螺旋運(yùn)動，一直達(dá)到反應(yīng)器的較上方。換句話說，溶液可以達(dá)到反應(yīng)器內(nèi)部的任意點(diǎn)，真正做到了無死角。由于攪拌速率可達(dá)每分鐘1800轉(zhuǎn)的高速，反應(yīng)得以充分完全。由于無死角的攪拌方式保證的肽的合成純度，ABI433型多肽合成儀（其退出多肽合成儀市場后一款儀器）至今在世界上還占有著很大的比例。當(dāng)然，ABI產(chǎn)品的售價也是的。由于部件使用頻率高，電磁閥會經(jīng)常損壞，而ABI將7個電磁閥做成模塊化的設(shè)計，壞掉一個電磁閥必須要更換整個模塊，無形中增加了維修成本。

CS336的設(shè)計原理是反應(yīng)器中點(diǎn)為圓心，上下做180度旋轉(zhuǎn)攪拌，攪拌速度可達(dá)180rpm，同時其采用了氮?dú)夤呐莘磻?yīng)方式的優(yōu)越性，將氮?dú)獯祫幼鳛榭蛇x反應(yīng)方式融入反應(yīng)方法中，多肽合成儀在科研領(lǐng)域的高耦合率效果得到充分體現(xiàn)。

多肽合成儀的現(xiàn)狀

進(jìn)入二十世紀(jì)以來，各大合成儀制造公司相繼推出了升級產(chǎn)品和新產(chǎn)品，如Protein Technologies公司推出Tribute雙通道多肽合成儀，將“短信通知”功能融入產(chǎn)品，增添了用戶與設(shè)備之間的緊密感，更加人性化；C S Bio公司對其從研發(fā)型到生產(chǎn)型設(shè)備的UV Online Monitor系統(tǒng)配置統(tǒng)一升級，用戶可直觀看到每一部氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)的狀態(tài)并可根據(jù)數(shù)據(jù)調(diào)整出合成效果與工藝；而Intavis則進(jìn)一步將UV監(jiān)測功能提升，可以在整個多肽合成反應(yīng)中不間斷監(jiān)測多肽反應(yīng)液的UV吸收信號，同時其軟件可以根據(jù)儀器監(jiān)測到的信號自動優(yōu)化氨基酸脫保護(hù)及交聯(lián)和清洗步驟的參數(shù)，*大的提升了合成難度高的多肽合成率；Advanced ChemTech公司自2005年破產(chǎn)重組后分裂為兩家新公司，其中Aapptec延續(xù)了其前身的生產(chǎn)步驟，推出Focus XC三通道合成儀。美國另一家公司CEM以蛋白質(zhì)有機(jī)反應(yīng)設(shè)備的制造著稱，推出了微波多肽合成儀同樣可以合成簡單的小分子多肽。其采用微波加熱方式，大大提高了反應(yīng)速度，將反應(yīng)的速率增加到之前多肽合成儀的幾倍甚至十幾倍?？上У氖窃诩訜岬那闆r下副反應(yīng)也相應(yīng)增多，多肽純度不能與之前的第三代甚至第二代產(chǎn)品媲美。另外，微波加熱方法無法放大，故不適合用作多肽藥物的研發(fā)。

5多肽合成儀歷史背景

固相合成法的誕生

多肽合成研究已經(jīng)走過了一百多年的光輝歷程。1902年，Emil Fischer*先開始關(guān)注多肽合成，由于當(dāng)時在多肽合成方面的知識太少，進(jìn)展也相當(dāng)緩慢，直到1932年，Max Bergmann等人開始使用芐氧羰基(Z)來保護(hù)α-氨基，多肽合成才開始有了一定的發(fā)展。到了20世紀(jì)50年代，有機(jī)化學(xué)家們合成了大量的生物活性多肽，包括催產(chǎn)素，胰島素等，同時在多肽合成方法以及氨基酸保護(hù)基上面也取得了不少成績，這為后來的固相合成方法的出現(xiàn)提供了實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。

1963年，Merrifield*次提出了固相多肽合成方法(SPPS)，這個在多肽化學(xué)上具有里程碑意義的合成方法，一出現(xiàn)就由于其合成方便，迅速，成為多肽合成的方法，而且?guī)砹硕嚯挠袡C(jī)合成上的一次革命，并成為了一支獨(dú)立的學(xué)科——固相有機(jī)合成(SPOS)，為此，Merrifield榮獲了1984年的諾貝爾化學(xué)獎。Merrifield經(jīng)過了反復(fù)的篩選，較終屏棄了芐氧羰基(Z)在固相上的使用，*先將叔丁氧羰基(BOC)用于保護(hù)α-氨基并在固相多肽合成上使用，同時，Merrifield在60年代末發(fā)明了臺全自動多肽合成儀，并*次合成生物蛋白酶，核糖核酸酶(124個氨基酸)。

1972年，Lou Carpino*先將9-芴甲氧羰基(FMOC)用于保護(hù)α-氨基，其在堿性條件下可以迅速脫除，10min就可以反應(yīng)完全，而且由于其反應(yīng)條件溫和，迅速得到廣泛使用，以BOC和FMOC這兩種方法為基礎(chǔ)的各種肽自動合成儀也相繼出現(xiàn)和發(fā)展，并仍在不斷得到改造和完善。同時，固相合成樹脂，多肽縮合試劑以及氨基酸保護(hù)基，包括合成環(huán)肽的氨基酸正交保護(hù)上也取得了豐碩的成果。

多肽合成儀的誕生

多肽固相合成技術(shù)的發(fā)明同時促進(jìn)了肽合成的自動化。世界上臺真正意義上的多肽合成儀出現(xiàn)在1960年代末至1970年代初期，它是利用氮?dú)夤呐輥韺Ψ磻?yīng)物進(jìn)行攪拌，用計算機(jī)程序控制來實(shí)現(xiàn)有限度的自動合成。即為后來總結(jié)歸納出的代多肽合成儀。雖然在攪拌方式和其他各項(xiàng)功能方面有著明顯的缺陷，但是它畢竟把人從實(shí)驗(yàn)室里解放出來，*大地提高了工作效率，所以受到了多肽科學(xué)家的一致贊揚(yáng)。

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