GB/T 4789.6—2003.
1范圍
GB/T 4789.6規(guī)定了食品中致瀉大腸埃希氏菌的檢驗(yàn)方法。
GB/T 4789.6適用于食品和食物中毒樣品中致瀉大腸埃希氏菌的檢驗(yàn)。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的較新版本。凡是不注日期的引用文件,其較新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB/T 4789.28一2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑
3設(shè)備和材料
3.1冰箱:0℃~4℃。
3.2恒溫培養(yǎng)箱:36℃士1℃,42℃.
3.3恒溫水浴鍋:100℃,65℃~～68℃,5o℃。
3.4顯微鏡:10×～100×。
3.5離心機(jī):3 00o r/ min。
3.6酶標(biāo)儀。
3.7均質(zhì)器或滅菌乳缽。
6操作步驟
6.1增菌
樣品采集后應(yīng)盡快檢驗(yàn)。除了易腐食品在檢驗(yàn)之前預(yù)冷藏外，一般不冷藏。以無菌操作取檢樣25 g(mL),加在225 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中,以均質(zhì)器打碎1 min或用乳缽加滅菌砂磨碎。取出適量,接種乳糖膽鹽培養(yǎng)基,以測(cè)定大腸菌群MPN,其余的移入500 mL廣口瓶?jī)?nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)6 h。挑取1環(huán),接種于1管30 mL腸道菌增菌肉湯內(nèi),于42℃培養(yǎng)18 h。
6.2分離
將乳糖發(fā)酵陽性的乳糖膽鹽發(fā)酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍(lán)瓊脂平板﹔污染嚴(yán)重的檢樣,可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱或伊紅美藍(lán)平板,于36℃±1℃培養(yǎng)18 h~24 h,觀察菌落。不但要注意乳糖發(fā)酵的菌落,同時(shí)也要注意乳糖不發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的菌落。
6.3 生化試驗(yàn)
6.3.1自鑒別平板上直接挑取數(shù)個(gè)菌落分別接種三糖鐵瓊脂(TSI)或克氏雙糖鐵瓊脂(KI)。同時(shí)將這些培養(yǎng)物分別接種蛋白陳水、半固體、pH?.2尿素瓊脂、KCN肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基。以上培養(yǎng)物均在36℃培養(yǎng)過夜。
6.3.2 TSI斜面產(chǎn)酸或不產(chǎn)酸﹐底層產(chǎn)酸﹐H,S陰性,KCN陰性和尿素陰性的培養(yǎng)物為大腸埃希氏菌。TSI底層不產(chǎn)酸,或H,S,KCN,尿素有任一項(xiàng)為陽性的培養(yǎng)物,均非大腸埃希氏菌。必要時(shí)做氧化酶試驗(yàn)和革蘭氏染色。

檢測(cè)流程步驟

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